Abstract
O objetivo deste trabalho foi caracterizar o gene vip3A de Bacillus thuringiensis e verificar a toxicidade da proteína Vip3Aa50 a larvas da lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda) e da lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis). O gene vip3A foi amplificado por PCR, com iniciadores específicos, e gerou um fragmento de 2.370 pb. Esse fragmento foi clonado em vetor pGEM-T Easy e, em seguida, sequenciado, subclonado em vetor de expressão pET-28a (+) e inserido em células de Escherichia coli BL21 (DE3). A expressão da proteína Vip3Aa50 foi induzida por isopropil-β-D-1-tiogalactopiranosídeo (IPTG), visualizada em SDS-PAGE e detectada por "Western blot". Os ensaios de toxicidade revelaram alta atividade da proteína Vip3Aa50 contra as larvas neonatas da lagarta-da-soja e da lagarta-do-cartucho, com CL50 de 20,3 e 79,6 ng cm-2, respectivamente. O gene vip3Aa50 é um novo gene da classe vip3A.
Highlights
A bactéria Bacillus thuringiensis Berliner é amplamente utilizada no controle biológico, há mais de 50 anos (Monnerat & Bravo, 2000)
Não foram localizados relatos na literatura sobre a ação inseticida da proteína Vip4
2. A proteína Vip3Aa50, proveniente do isolado I131 de Bacillus thuringiensis, é expressa na forma ativa e tóxica a larvas neonatas de Spodoptera frugiperda e Anticarsia gemmatalis
Summary
Utilizou-se o isolado I131 de B. thuringiensis, da coleção do Laboratório de Genética de Bactérias e Biotecnologia Aplicada da Unesp (Jaboticabal, SP). O gene vip foi caracterizado por PCR, com iniciadores específicos (Tabela 1) descritos por Loguercio et al (2002). Para verificar a presença do gene vip3A no isolado I131, foram utilizadas, como controles, as linhagens B. thuringiensis var. Tolworthi HD-125 (produtora da toxina lepidóptero-específica) e B. thuringiensis var. Tenebrionis (toxina coleópteroespecífica), provenientes do Bacillus Genetics Stock Center, Columbus, Ohio. A linhagem padrão lepidóptero-específica B. thuringiensis var. Tolworthi HD-125, apresenta o gene vip3A e foi utilizada para verificar o perfil de amplificação do gene vip3A do isolado I131 nas reações de PCR (Tabela 1). Iniciadores utilizados no sequenciamento do gene vip3A do isolado I131 de Bacillus thuringiensis. Iniciador VIP5(1) VIP2(1) VIP3(1) VIP6(1) V1R(1) 61BF(2) 61BR(2) 61CR(2) 61DF(2) P1F(3) P2R(3) T7 SP6
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