Abstract

實驗目的:鹼性纖維母細胞生長因子(Basic fibroblast growth factor, bFGF)在生物體內具有多種功能,並且在細胞生長與分化上扮演重要角色,但其對於牙根尖細胞之影響及訊息傳導路徑還未被完全了解。本實驗之目的在探討bFGF對牙根尖細胞生長與分化的影響,以及其中MEK/ERK訊息傳導路徑的角色。 實驗方法:加入不同濃度bFGF於人類牙根尖細胞做刺激與培養,部分組別加入U0126 (MEK/ERK抑制劑)。透過細胞存活率分析 (MTT assay)、反轉錄聚合酶連鎖反應 (RT-PCR)、西方墨點法 (western blot)、鹼性磷酸酶染色(ALP stain)及免疫螢光染色(immunofluorescent)來檢測bFGF對牙根尖細胞在細胞生長、分化及相關之基因與蛋白質、纖維母細胞生長因子接受器(FGFR)的影響。 實驗結果:bFGF促進牙根尖細胞生長與相關基因及蛋白之表現,包括cyclin B1、cdc2及cdc25c。在成骨/成牙本質分化方面,經過24小時bFGF刺激後,Runx2和osteocalcin表現會增加,但5天之bFGF刺激則會抑制ALP活性。FGFR1、2、3及4均會表現於牙根尖細胞。單獨加入U0126會抑制細胞生長,而合併bFGF使用會降低原本bFGF促進生長之能力。此外,U0126可以抑制因bFGF提升之osteocalcin與TIMP1基因及蛋白表現,而對Runx2與ALP則無影響。U0126亦無法逆轉因bFGF下降之ALP活性。 結論:bFGF對人類牙根尖細胞的影響是很多樣性的,會因藥物刺激的時間而不同,而MEK/ERK在其中亦扮演很重要的角色。本實驗的結果提供我們對bFGF與牙根尖細胞的作用及訊息傳導路徑更進一步的了解,對於未來應用在牙髓壞死之牙齒的根尖生成術與牙髓、牙本質再生也有幫助。

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