Bacillus subtilis NB-10之蛋白酶特性分析及其在飼料豆粕發酵的應用

Abstract

中文摘要 本研究利用大豆水溶性蛋白洋菜平板，由納豆、動物糞便、土壤及標準菌株中篩選能夠分解大豆過敏性蛋白質的細菌，共篩選出具有分解大豆水溶性蛋白之細菌83株。利用Bradford蛋白質定量方法比較分離株分解大豆蛋白的能力高低，從中挑選具有高分解力的分離株7株與標準菌株3株，進一步再比較此10株菌株的蛋白酶活性，結果顯示，編號NB-10的分離株其蛋白酶活性表現最高, 經由定序結果將其命名為Bacillus subtilis NB-10並進行後續實驗。 利用搖瓶探討B. subtilis NB-10培養條件的結果顯示，以TSB (Tryptic soy broth)為培養基質，其適合的生長溫度為30℃，培養12hr後菌株的生長開始趨於平緩，蛋白酶也開始生成，在培養32hr後具有最高的蛋白酶活性。B. subtilis NB-10分泌的蛋白酶為胞外蛋白酶，蛋白酶之最適反應條件為pH 11與60℃，在pH 6~8與30~37℃之穩定性較佳，顯示在中性環境及低溫的環境下，蛋白酶可維持較高的穩定性。 接種B. subtilis. NB-10於大豆蛋白液進行12-hr液態培養，由SDS-PAGE分析結果顯示，接菌培養可有效的去除大豆蛋白液中的過敏蛋白β-conglycinin與glycinin；另外，實際應用於大豆粕進行24-hr固態發酵試驗，經SDS-PAGE分析結果顯示，大豆粕的過敏蛋白β-conglycinin與glycinin中acidic polypeptide有被分解的現象，對照西方轉漬法的結果，經過B. subtilis NB-10發酵的豆粕確實不會引起β-conglycinin與glycinin的acidic polypeptide的免疫反應。因此，由納豆中篩選的B. subtilis NB-10具有分解致過敏蛋白β-conglycinin與glycinin的能力，未來應具有應用於飼料豆粕發酵之潛力。