Abstract

The conservation of cells without morphologic, physiologic or genetic changes is a biotechnology necessity. Bacillus firmus strain 37 is a sporulating bacteria that produces the cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) enzyme, which transforms starch into cyclodextrins (CDs). This study aimed to evaluate the maintenance and preservation of B. firmus strain 37 stored in a solid medium, sterile soil and in glycerol at low temperature (-70oC). In order to evaluate the best bacteria maintenance method, cell immobilization procedures were used on inorganic matrices. The immobilized cells were submitted to the initial biomass effect test and scanning electron microscopy (SEM). Periodic transfer was not an appropriate method, because the strain reduced the production of CGTase. The storage in sterile soil proved effective and the enzyme production remained constant. The conservation in low temperatures was also satisfactory, with cell counts practically the same after 360 days. The immobilization evaluated by SEM did not show any difference in the adsorption of the cells preserved by the different methods. The same happened for the initial biomass effect test, which presented higher beta-CD production when 1.5 g of cells was used.

Highlights

  • As ciclodextrinas (CDs) são oligossacarídeos cíclicos com seis, sete, oito ou mais unidades de glicopiranose unidas por ligações alfa-(1,4) (VAN DER VEEN et al, 2000; DEL VALLE, 2004)

  • Cyclodextrin glucanotransferase production by free and agar gel immobilized cells of Bacillus circulans ATCC 21783

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Summary

Material e métodos

O microrganismo utilizado foi o B. firmus cepa 37 isolado de solo de plantação de mandioca por Matioli et al (1998). Inicialmente a cepa foi preservada pelo método de transferência periódica (repique), em meio de cultivo sólido contendo (% p/V): amido solúvel 1,0; polipeptona 0,5; extrato de levedura 0,5; K2HPO4 0,1; MgSO4.7H2O 0,02; Na2CO3 1,0 e agar 1,5. Para a conservação em baixas temperaturas, o microrganismo foi novamente cultivado em meio sólido e as placas incubadas a 37oC por 48h. As colônias foram transferidas para o meio de cultivo líquido de mesma composição, com exceção do ágar. O cultivo foi realizado a 37oC por 48h com agitação de 120 rpm. As células foram removidas do meio por centrifugação As células foram removidas do meio por centrifugação (3.700 rpm, 10 min. e 4oC), estocadas a -70oC, utilizando-se como agente protetor o glicerol a 10% (p/V) e com contagem inicial de células de 107 UFC mL-1

Procedimentos de reativação
Métodos analíticos
Manutenção e preservação da cepa
Biomassa inicial
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