Abstract

Apoptose e seus mecanismos reguladores são eventos fisiológicos cruciais para a manutenção da homeostase placentária, e o desequilíbrio desses processos pode comprometer a função placentária e, consequentemente, o sucesso da gravidez. Neste estudo, investigou-se a apoptose utilizando-se histomorfometria em lâminas coradas em HE e submetidas à reação de TUNEL. Além disso, avaliou-se a expressão de Bcl-2 e das caspases 8 e 3, pela reação de polimerase em cadeia em tempo real, em placentas saudáveis em diferentes estádios de gestação. Amostras de placentônios de vacas com quatro, seis e nove meses de gestação foram colhidas e processadas. O índice apoptótico aumentou progressivamente com o avanço da gestação. Tanto o Bcl-2 quanto as caspases 3 e 8 foram expressas nos três períodos estudados, sendo a expressão de Bcl-2 menor que a de caspase 8, que é menor que a de caspase 3. Estes resultados indicam que essas moléculas estão envolvidas na via apoptótica ativada na maturação placentária, exibindo um padrão de expressão ao longo da gestação e contribuindo para o equilíbrio fisiológico da celularidade e renovação celular na placenta bovina.

Highlights

  • Apoptosis and its regulating mechanisms are crucial physiological events for the maintenance of the placental homostasis; and disequilibrium of these processes may compromise placental function and the success of the pregnancy

  • A apoptose foi facilmente reconhecida morfologicamente em todos os campos microscópicos de todas as amostras processadas

  • VASCONCELOS, A.C.; LAM, K.M. Apoptosis in chicken embryos induced by the infectious bursal disease virus

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Summary

MATERIAL E MÉTODOS

Foram utilizadas 15 placentas de vacas mestiças provenientes do Frigorífico Alvorada, situado no município de Igarapé, MG. Para a verificação dos amplicons, utilizaram-se alíquotas de 3μl da PCR na eletroforese em gel de poliacrilamida, corado com nitrato de prata. Com o objetivo de se obter um fragmento de PCR puro e específico para quantificação e utilização como padrão na PCR em tempo real, foi feita a purificação dos amplicons alvos de Bcl-2, caspase 3 e 8 e s26, por meio de gelpurificação por eletroeluição. A reação da PCR em tempo real foi realizada no aparelho ABI Prism 7000 SDS. Como controle positivo e para posterior quantificação dos resultados, uma curva-padrão de todos os amplicons purificados foi construída com base nas diluições seriais. Para confirmação do tamanho dos fragmentos amplificados por PCR em tempo real, foi realizada uma curva de dissociação como parte do programa estabelecido no ABI Prism 7000 SDS. Os fragmentos amplificados foram posteriormente visualizados por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida, corado com nitrato de prata

RESULTADOS E DISCUSSÃO
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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