Antiproliferative effect of silencing mTOR gene on MCL Jeko-1 cell line and its mechanism

Abstract

目的探讨RNA干扰沉默mTOR基因后对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法设计针对mTOR基因短发夹RNA，将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中，构建mTOR shRNA真核表达载体，经脂质体转染入Jeko-1细胞，采用实时定量PCR及Western blot方法鉴定其干扰效果；用MTT法绘制细胞生长曲线，经流式细胞术检测细胞凋亡的变化，用Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、procaspase-3、procaspase-9及mTOR下游底物激酶P70S6K、p-P70S6K的表达。结果mTOR shRNA转染Jeko-1细胞后，mTOR基因的mRNA及蛋白表达均明显下降（P< 0.05）；转染组增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组（P<0.05），mTOR shRNA转染48 h后，凋亡率为（36.62±3.24）%，而Neg-shRNA组和空白对照组分别为（2.58±1.04）%、（1.24±0.30）%，差异有统计学意义（P<0.05）；凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9的表达下降，而Bax表达上升，mTOR下游底物激酶P70S6K未见明显变化，而其活性形式p-P70S6K的表达下降。结论干扰沉默mTOR基因后可通过抑制mTOR信号通路的活性，抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖，激活凋亡相关蛋白诱导细胞凋亡。