Analytical sensitivity of staining and molecular techniques for the detection of Cryptosporidium spp. oocysts isolated from bovines in water samples: a preliminary study

Abstract

RESUMEN Cryptosporidium spp. es un protozoario mundialmente distribuido, que causa enfermedad digestiva en diferentes especies animales incluido el humano. Los ooquistes excretados contaminan aguas y suelos, constituyendo una amenaza para la salud publica. Debido al escaso numero de ooquistes presentes en el ambiente y su reducida dosis infectante se hacen necesarios metodos rapidos y sensibles para deteccion en muestras ambientales. En este trabajo se comparo la sensibilidad analitica de dos tecnicas de tincion, Ziehl-Neelsen modificado y Aureamina, y un PCR anidado que amplifica una region de ~520pb del gen 18S rDNA en la deteccion de Cryptosporidium spp. en muestras de agua. Se inocularon concentraciones conocidas de ooquistes en agua, realizando diluciones seriadas. Previa filtracion se recuperaron los ooquistes para aplicacion de los metodos en estudio. Los resultados demostraron que ambas tinciones tienen similar sensibilidad analitica, detectando aproximadamente ocho ooquistes/mL, mientras que el PCR anidado detecto hasta seis ooquistes/mL. En conclusion, dichos metodos diagnosticos, asi como los protocolos de inoculacion y recuperacion de ooquistes, son eficaces para deteccion del parasito en agua, contribuyendo a la implementacion de protocolos de diagnostico estandarizados en muestras de agua ambientales.