Analyse des Nativen Zustands von Proteinen durch Hochdruck NMR‐Spektroskopie unter Berücksichtigung des Ensembles Unstrukturierter Konformationen

Abstract

AbstractDie Analyse druckabhängiger Änderungen der chemischen Verschiebung von Proteinen erlaubt es, Aussagen über strukturelle Fluktuationen zu machen, die diese bereits bei Umgebungsdruck aufweisen. Das Problem, allgemeine Effekte, die mit einer Erhöhung des hydrostatischen Drucks einhergehen, von strukturell bedingten Effekten auf die chemische Verschiebung zu trennen, wurde bisher durch das Einbeziehen der Eigenschaften unstrukturierter Modellpeptide angegangen. In dieser Arbeit wurden chemische Verschiebungen in 2D 1H‐15N‐HSQC Spektren von chemisch als auch druckdenaturierten Zuständen des Kälteschockproteins B aus Bacillus Subtilis (BsCspB) zugeordnet und ihre Abhängigkeit von Änderungen des hydrostatischen Drucks ausgewertet. Die durch hydrostatischen Druck denaturierte Polypeptidkette wurde verwendet, um allgemeine Effekte von strukturbedingten Effekten auf 1H und 15N chemische Verschiebungen zu trennen. Daraus resultierende Interpretationen der druckabhängigen Änderungen der chemischen Verschiebungen werden im strukturellen Kontext diskutiert. Es wurde festgestellt, dass das Ensemble unstrukturierter Konformationen von BsCspB anders auf eine Erhöhung des Drucks reagiert, als es unstrukturierte Modellpeptide tun. Daraus kann geschlussfolgert werden, dass der Ansatz, mit dem man allgemeine Effekte, die durch eine Erhöhung des Drucks hervorgerufen werden, abschätzt, die strukturellen Rückschlüsse ändert, die anhand einer Analyse von chemischen Verschiebungen getroffen werden.