An experimental study of CD4 targeted chimeric antigen receptor modified T cell with anti-lymphoma activity

Abstract

目的探讨针对CD4膜蛋白的CAR-T细胞对CD4+T细胞淋巴瘤细胞的靶向特异性杀伤作用。方法采用重组DNA技术构建含4-1BB共刺激分子的第二代针对CD4的CAR慢病毒载体，应用293T细胞包装慢病毒，采用流式细胞术检测T细胞的转染效率及T细胞亚群动态变化，采用流式细胞术微球法检测培养上清中IFN-γ浓度。结果①构建的慢病毒载体转染激活的T细胞后CAR膜蛋白阳性率达到50.0%~70.0%。T细胞激活后部分CD8+T细胞弱表达（dim）CD4膜蛋白。T细胞转染针对CD4的CAR慢病毒后CD4+ T细胞、CD8+ CD4dim T细胞逐渐被清除。②CAR-T细胞、对照组T细胞（空载体转染的T细胞）以8∶1效靶比分别与CD4+人T细胞淋巴瘤细胞株KARPAS 299细胞共培养24 h，杀伤效率分别为（96.9±2.1）%和（11.2±3.1）%，前者明显高于后者（t=7.137，P=0.028）。③CAR-T细胞单独培养，与转染慢病毒载体表达人CD4的K562细胞（K562-CD4细胞）、K562细胞共培养后上清中IFN-γ浓度分别为（1 785±268）、（15 648±2 168）、（1 978±354）pg/ml，CAR-T细胞与K562-CD4细胞共培养上清IFN-γ浓度明显高于其他两组，差异有统计学意义（P<0.01）。结论CD4特异性CAR-T细胞效应细胞免疫表型为CD8+ CD4+ T细胞，在体外具有杀伤正常CD4+ T细胞和CD4+ T细胞淋巴瘤细胞的活性，对于CD4dim T细胞也有较好的清除活性。