Abstract
Cell lines of neem (Azadirachta indica A. Juss.) grown in liquid suspension have shown to produce bioactive secondary metabolites, particularly triterpenoids. In consequence, its use as a control of medical microorganisms (like dermatophytes) is proposed. The main goal of this study was to assess the antifungal activity of methanolic extracts from neem cultured cell suspensions on several isolates of Trichophyton mentagrophytes (five isolates), Trichophyton rubrum (five isolates) and Epidermophyton floccosum (three isolates). Neem cell suspension cultures were scaled up, from which a raw methanolic extract was obtained. This extract was fractionated by silica gel column chromatography. The raw methanolic extract and its fractions were used in order to determine the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) on the dermatophytes isolates by following M38-A2 broth microdilution method. Antimycotic Terbinafine was used as positive control. The results shown that neem raw cellular biomass extract inhibits the growth of T. mentagrophytes, T. rubrum and E. floccosum in at least 100%. In the evaluations of the separated fractions, it was observed that the low polarity fractions had higher antifungal activity (MIC=109 μg/mL) than the raw extract per se (MIC=2500 μg/mL) and the most polar ones (MIC=7000 μg/mL). The latter suggest that neem cells cultured in liquid suspension produces compounds with antifungal activity, being more active those present in the low polarity fractions.
Highlights
Veoxtlr.aXcVtoI sNdoe. 2biDomiciaesmabcreelu2l0ar14de1n8e7e-m193 latter suggest that neem cells cultured in liquid suspension produces compounds with antifungal activity, being more active those present in the low polarity fractions
Las suspensiones celulares de A. indica se iniciaron por transferencia en forma aséptica de una cantidad estimada de 500 mg de callos friables de 8 semanas de edad a matraces Erlenmeyer de 250 mL con 50 mL de medio líquido consistente en sales básicas Murashige & Skoog (MS, 1962) con orgánicos mínimos (MSMO, Sigma M 6899), sacarosa 3 % (p/v), glicina 2 mg/L, ácido nicotínico 0.5 mg/L, Piridoxina-HCl 0.5 mg/L y tiamina-HCl 0.1 mg/L, y suplementado con ácido indol butírico (IBA) 19,7 μM (4 mg/L) y 6-benzil amino purina (BAP) 4,44 μM (1 mg/L), todo diluido en agua destilada
Los reportes de Suresh et al (1997) y Mahmoud et al (2011), indican que la mezcla de ciertas fracciones de extractos de neem aisladas por HPLC exhiben una actividad antifúngica incrementada, respecto a compuestos puros aislados, sugiriendo entonces un efecto sinérgico entre los triterpenoides presentes en los extractos de A. indica
Summary
Actividad antifúngica de extractos de biomasa celular de neem sobre aislamientos de dermatofitos. El objetivo principal de este trabajo fue evaluar a través de un método de referencia in vitro la actividad antifúngica de diferentes extractos de cultivos celulares de neem sobre varios aislamientos de Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum y Epidermophyton floccosum. Con los extractos obtenidos se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), siguiendo el método de microdilución en caldo M38-A2, con cinco aislamientos de T. mentagrophytes, cinco de T. rubrum y tres de E. floccosum. Lo anterior indica que las células de neem cultivadas en suspensión producen compuestos con actividad antifúngica, siendo más bioactivos los presentes en las fracciones de menor polaridad. Palabras clave: método de microdilución en caldo, cromatografía, cultivo de células en suspensión, concentración mínima inhibitoria, compuestos bioactivos
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