넙치에서의 Vbrio vulnificus 오염 방지를 위한 백신 연구

Abstract

비브리오 패혈증의 원인균인 V vulnificus에 대한 어류의 저항성을 증강시키기 위한 연구로써, 비브리오 백신이 경구로 투여된 넙치에서의 특이 또는 비특이적 면역반응을 조사하였다. 넙치에 대하여 UHKB (uncoated heat killed bacterin of V. vulnincus)를 20rng1kg b.w.의 농도로 경구를 통하여 4주 연속 투여 (4W) 또는 1주 동안 투여하고 2주 동안 투여하지 않다가 다시 1주 동안 투여 (1-2-lW) 하는 두 가지 방법으로 실시한 후 형성된 혈청내 특이 항체량을 비교한 결과 1-2-1W group은 4W group에는 도달하지 못하였지만 명백히 증가된 특이 항체량을 보여주었다. UHKB를 1주일에 2회씩 4주 연속 투여한 실험구가 최종 투여 후 2주 째부터 가장 높은 항체가를 보여 주었고 이러한 경향은 전 실험기간 동안 계속 유지되었다. 이러한 실험 결과는 단일세포수준에서 분석된 특이항체 생성세포 (SASC) 수의 계측에서도 확인되었는데 백신의 최종 경구투석 후 1주 째부터 대조구에 비하여 증가를 보인 실험구의 SASC수는 최종 투여 후 8주 째까지 유지되었다. 그러나 내산성으로 제조된 백신 (ECHB)은 V.vulnificus에 대한 항체생성 면역반응 그리고 인위 감염시킨 V vulnifcus (1<TEX>$\times$</TEX>10 CFU/kg b.w.) 생균의 체내 제거능력 분석 양쪽 모두에서 UHKB에 비하여 낮은 결과를 보여 주었다. 그러므로 넙치에 경구 투여된 UHKB는 V vulnificus의 오염을 억제 할 수 있는 효과적인 방법으로 확인되었으나 내산성으로 제조된 ECHB는 면역반응 증가를 유도하지 못하는 것으로 나타났다. To study the increased resistance in fish against Vibrio vulnificus known as an important agent of vibrio septicemia in human, we analyzed specific and nonspecific immune response in flounder after administration of V. vulnificus bacterins by oral route. It contained the comparison of antibody concentrations in the sera of flounder after oral administration by two different protocols with uncoated heat killed bacterin of V vulnificus (UHKB, 20 mg/kg body weight), i.e., 4 weeks continuously (group 4W) and taking 2 weeks resting period between the 1st and last week of administration (group 1-2-1W). Even though, 1-2-1W group showed significantly increased level of specific antibody in serum, it did not reach to that of 4W group. Certainly, flounder vaccinated twice a week for four weeks (20 mg/kg b.w.) showed increased concentration of specific antibody against V. vulnificus at week 2 after last administration by oral route and maintained throughout the experimental period. It also was confirmed by the increased numbers of specific antibody secreting cells (SASC) in the leukocytes isolated from the splenocytes of the flounder of 4W group at week 1 after last administration until the end of experimental period. However, enteric, acid-resistant film coated heat killed bacterin (ECHB) did not show both greater immune reaction for antibody production and faster elimination of a challenge dose of V. vulnificus compared with those of the UHKB. These results suggested that UHKB administered by oral route was very effective method to prevent the contamination of V vulnificus in flounder, and did not show the increased antigenicity by coating the surface with acid-resistant film.