교잡된 Cordyceps militalis 균주의 RAPD 분석 및 생리활성물질인 cordycepin 함량 측정

Abstract

KACC에서 분양받은 C. militaris 4균주와 야생에서 채집된 6균주 그리고 교배 육성한 4균주를 대상으로 DNA분석에 의한 분류동정을 시행하였다. 표준균주 10균주와 교잡균주 4균주에서 조사된 전 부위(ITS1, 5.8S rDNA, ITS2)에서 많은 염기서열 차이를 보이고 있으나 같은 종으로 확인된 표준균주들과 수집균주들과 비교한 바 같은 균으로 분류된 것을 확인할 수 있었다. 교잡에 쓰여 졌던 표준 균주에서 교잡된 교잡균주 중 가장 우수한 교잡균주 mat1과 교잡에 사용되었던 표준균주(MPNU10306, MPNU10366)를 선택하여 RAPD 분석을 하였으며, RAPD에서 나타난 각 균주간의 다양한 유전적 변이가 관찰되었다. 이는 새로운 C. militaris종 균주로 판단되어지며, HPLC 분석에서도 교잡에 쓰여 졌던 표준균주보다 교잡한 C. militaris 균주가 cordycepin 생산량이 우수하게 나타났으며, 이는 교잡균주가 cordycepin 함량을 보다 더 높일 수 있음을 의미하고 상업적 가치가 있을 것이라 판단되어지며, 지속적인 연구가 필요할 것으로 생각된다. The C. militaris belongs to entomopathogenic fungi, which have their specific sequences in internal transcribed spacer regions (ITS1 and ITS2) depending on species. In this study, to identify the phylogenetic relationship of the strain hybrided by mating of C. militaris, we compared DNA sequences of ITS regions and 5.8S ribosomal DNA (rDNA) repeat unit of hybrid strain and its parental strains. The result revealed that hybrid strains are C. militaris species. In addition, cordycepins produced by hybrid strains and other strains of C. militaris were analyzed by HPLC with 20mM <TEX>$KH_2PO_4$</TEX> of mobile phase and C-18 columns. The result indicated that the strain hybrided by mating produce higher concentration of phytochemical cordycepin than other C. militaris strains.