탄저병균에 대하여 길항작용을 보이는 Burkholderia cepacia EB215로부터 분리한 Pyrrolnitrin의 항균활성

Abstract

오이 뿌리조직으로부터 분리한 식물내생세균 EB215균은 탄저병균인 Colletotrichum species에 대하여 강한 항균활성을 보였다. 이 균은 생리 생화학적 특성과 Biolog 실험 및 16S rDNA 유전자 서열에 의해 Burkholderia cepacia로 동정되었다. 이 균의 항균물질 생산을 위한 최적배지는 nutrient 액체(NB) 배지로 그리고 배양기간은 3일로 결정되었다. B. cepacia EB215 균주의 NB 배양체로부터 원심분리, n-hexane 분획, silica gel 컬럼, preparative TLC 및 in vitro 생물검정 등을 통하여 한 개의 항균물질을 분리하였다. 이 물질은 질량분석과 핵자기공명 분석을 통하여 pyrrolnitrin으로 동정되었다. Pyrrolnitrin은 고추 탄저병(Colletotrichum coccodes), 오이 탄저병(Colletotrichum orbiculare), 벼 도열병(Magnaporthe grisea), 벼 잎집무늬마름병(Corticium sasaki) 등의 4가지 식물병에는 <TEX>$11.1\;{\mu}g/ml$</TEX> 낮은 농도에서도 90% 이상의 높은 방제활성을 보였다. 그리고 또한 토마토 잿빛곰팡이병(Botrytis cinerea)과 밀 붉은녹병(Puccinia recondita)에 대해서는 <TEX>$33.3\;{\mu}g/ml$</TEX> 이상의 농도에서 90% 이상의 방제활성 보였다. 하지만 Phytophthora infestans에 의한 토마토 역병에 대해서는 전혀 항균활성이 없었다. 앞으로 B. cepacia EB215균을 이용한 미생물살균제 개발에 대하 연구를 진행할 예정이다. An endophytic bacterial strain EB215 that was isolated from cucumber (Cucumis sativus) roots displayed a potent in vivo antifungal activity against Colletotrichum species. The strain was identified as Burkholderia cepacia based on its physiological and biochemical characteristics, and 16S rDNA gene sequence. Optimal medium and incubation period for the production of antifungal substances by B. cepacia EB215 were nutrient broth (NB) and 3 days, respectively. An antifungal substance was isolated from the NB cultures of B. cepacia EB215 strain by centrifugation, n-hexane partitioning, silica gel column chromatography, preparative TLC, and in vitro bioassay. Its chemical structure was determined to be pyrrolnitrin by mass and NMR spectral analyses. Pyrrolnitrin showed potent disease control efficacy of more than 90% against pepper anthracnose (Colletotrichum coccodes), cucumber anthracnose (Colletotrichum orbiculare), rice blast (Magnaporthe grisea) and rice sheath blight (Corticium sasaki) even at a low concentration of <TEX>$11.1\;{\mu}g/ml$</TEX>. In addition, it effectively controlled the development of tomato gray mold (Botrytis cinerea) and wheat leaf rust (Puccinia recondita) at concentrations over <TEX>$33.3\;{\mu}g/ml$</TEX>. However, it had no antifungal activity against Phytophthora infestans on tomato plants. Further studies on the development of microbial fungicide using B. cepacia EB215 are in progress.