고구마에서 ADP-Glucose Pyrophosphorylase Small Subunit cDNA의 Antisense 발현에 의한 전분생합성 저해

Abstract

고구마 유래 ibAGP1, ibAGP2 유전자가 antisense 방향으로 각각 도입된 벡터를 섞어서 particle bombardment 방법으로 고구마 배발생 캘러스에 형질전환을 수행하였다. 선발배지에서 형성된 배발생 캘러스로부터 체세포 배발생 과정을 거쳐 식물체로 재분화된 개체에서 PCR과 Southern 분석으로 고구마의 염색체 게놈에 ibAGP1, ibAGP2 유전자가 도입되었음을 확인하였고, western blot을 통해 형질전환체의 AGPase small subunit 효소 생산이 전반적으로 대조구에 비해 감소하였다. 또한, 형질전환체의 잎과 괴근 절편체의 전분염색 결과에서도 대조구에 비해 부분적으로 전분염색이 이루어짐을 알 수 있었다. 특히, ibAGP1, ibAGP2 유전자가 동시에 들어 있는 식물체 잎에서는 ibAGP1만 들어있는 것에 비해 전분합성이 더욱 감소됨을 확인하였다. 고구마의 경우 감자를 비롯한 다른 식물들과는 달리 외형적인 생장자체를 심하게 저해하였으며 괴근이 형성되지 않아 ibAGP1, 2의 발현 여부가 식물체의 생장에 절대적인 영향을 미침을 시사한다. Embryogenic calluses derived from shoot apical meristem explants of sweetpotato were subjected to particle bombardment to generate transgenic plants for antisense expression of cDNAs encoding two different AGPase small subunit (ibAGP1 and ibAGP2). Plants were generated via somatic embryogenesis. PCR and Southern analysis demonstrated that the incorporation of ibAGP1 and ibAGP2 into the genome in an antisense orientation. Immunoblot analysis confirmed reduced levels of AGPase small subunit in transgenic plant leaves. Plants with both ibAGP1 and ibAGP2 produced a lower level of the protein than plants with ibAGP1 alone. iodine test demonstrated that transgenic plant leaves and storage root accumulated reduced amounts of starch. Iodine staining of leaf tissues indicated that transgenic plants accumulated less amount of starch than control. In accordance with western blot analysis, plants with both ibAGP1 and ibAGP2 accumulated a lower amount of starch than plants with ibAGP1 alone. Both transgenic plants exhibited a severely retarded growth, resulting in bare survival. It is suggested that disrupted expression of the gene encoding AGPase small subunit is lethal to the growth of sweetpotato contrast to other species including potato.