Изучение эффектов стромально-васкулярной фракции, культивированных стволовых клеток жировой ткани и паракринных факторов кондиционной среды при терапии тяжелых лучевых поражений кожи у крыс

Abstract

Цель - изучение влияния трансплантации стромально-васкулярной фракции (СВФ), культивированных мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК) жировой ткани и введения паракринных факторов кондиционной среды, полученных при культивировании ММСК, на течение тяжелых местных радиационных поражений кожи. Методика. Крыс инбредной линии Wistar-Kyoto облучали на рентгеновской установке в дозе 110 Гр, при мощности дозы 20,0 Гр/мин. Напряжение на трубке 30 кВ, ток 6,1 мА, фильтр Al толщиной 0,1 мм, площадь поля облучения составляла 8,5 см2. Трансплантацию клеток СВФ жировой ткани проводили двукратно в дозах 2,2 х 106 и 3,0 х 106 на 28-е и 35-е сут после облучения, соответственно. Культивированные ММСК вводили в дозах 2,8 × 106 и 3,4 × 106 на 28-е и 35-е сут после действия радиации. Паракринные факторы кондиционной среды вводили пятикратно с 1-х по 10-е сут после облучения, подкожно по 1,0 мл (общий белок 8 мг/мл). Тяжесть лучевого поражения кожи и эффекты терапии оценивали в динамике по клиническим проявлениям, с помощью планиметрии и патоморфологических методов. Результаты. Выбранный режим радиационного воздействия вызывал тяжелые лучевые поражения кожи с длительно (до 5 мес) незаживающими язвами. Площадь лучевых язв у крыс контрольной группы в период с 28-х до 84-х сут медленно уменьшалась от 2,73±0,17 см2 до 1,52±0,17 см2, а через 4 и 5 мес после облучения составляла 0,52±0,15 см2 и 0,05±0,04 см2, соответственно. Во всех опытных группах после 84-х сут отмечалась тенденция к снижению площади лучевых язв, а через 4 мес после облучения уменьшение площади язв и снижение тяжести поражения в опытных группах по сравнению с контролем были статистически значимыми (р < 0,05). У 70-80 % крыс в опытных группах через 4 мес после облучения наблюдалась полная эпителизация радиационных ран с образованием атрофического рубца, а в контрольной группе в этот период атрофические рубцы наблюдались лишь у 40% крыс. Заключение. Трансплантация СВФ жировой ткани или культивированных ММСК, а также введение паракринных факторов кондиционной среды способствуют усилению регенераторных процессов в пораженной ткани, и могут быть в равной степени эффективны при терапии тяжелых лучевых поражений кожи в эксперименте. Aim. To study effects of stromal-vascular fraction (SVF) transplantation, cultured multipotent mesenchymal stem cells (MMSC) of adipose tissue, and administration of paracrine factors of the conditioned MMSC culture medium on the course of severe, local radiation lesions of the skin. Methods. Wistar-Kyoto rats were irradiated with X-rays at a dose of 110 Gy and a dose rate of 20.0 Gy/min. The tube voltage was 30 kV, current - 6.1 mA, filter -0.1 mm thick A1, and irradiation field area - 8.5 cm2. Transplantation of adipose tissue SVF cells was performed twice at doses of 2.2 x 106 and 3.0 x 106 on the 28th and 35th days after irradiation, respectively. Cultured MMSC was administered at doses of 2.8 x 106 and 3,4 x 106 on the 28th and 35th days after irradiation. Paracrine factors of the conditioned medium were administered five times from the 1st to the 10th day after irradiation at a dose of 1.0 ml, s.c. (total protein, 8 mg/ml). Severity of radiation damage of the skin and effects of the therapy were followed up by clinical manifestations using planar geometry and pathomorphological methods. Results. Radiation exposure under the specified conditions caused severe radiation injuries of the skin with nonhealing ulcers that persisted for up to 5 months after irradiation. In control rats the area of radiation ulcers slowly decreased between the 28th and 84th days from 2.73 ± 0.17 cm2 to 1.52 ± 0.17 cm2, respectively, and was 0.52 ± 0.15 cm2 and 0.05 ± 0.04 cm2 at 4 and 5 months after irradiation. In all experimental groups, the healing was more intensive after the 84th day with a tendency to decrease the area of radiation ulcers; at 4 months after irradiation, statistically significant decreases in the area of ulcers and severity of lesions were observed in the experimental groups compared to the control (p <0.05). At four months after irradiation, 70-80% of rats in the treatment groups showed complete epithelialization of radiation wounds with formation of an atrophic scar whereas in the control group during the same period, atrophic scars were observed only in 40% of rats. Conclusion. Transplantation of adipose-derived SVF or cultured adipose tissue MMSC as well as administration of paracrine factors of the conditioned medium contributed to the enhancement of regenerative processes in the affected tissue and can be equally effective in the treatment of severe experimental radiation lesions of the skin.