발효 차가버섯 추출물이 인체 종양세포주 증식에 미치는 영향

Abstract

발효 및 비발효 차가버섯 수용성 추출물이 정상 세포주 NIH3T3 mouse normal fibroblast cell 및 인체 종양 세포주 AGS human gastric cancer cell(위암), HCT-15 human colon cancer cell(대장암), Hep3B human hepatoma cancer cell(간암), MCF-7 human breast cancer cell(유방암), HeLa human cervical cancer cell(자궁경부암)에서 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay 방법에 의한 세포 증식 억제와 암세포 증식억제의 기전 연구의 일환으로 apoptosis가 일어날 때 나타나는 DNA fragmentation을 agarose gel electrophoresis 방법으로 검토하였다. 인체 종양 세포주의 생육저해 효과가 발효 차가버섯 추출물이 비발효 차가버섯 추출물보다 강한 것으로 나타났다. 그러나 동일한 실험조건하에서 마우스 정상 세포주 NIH3T3은 80% 이상의 생존율을 나타내어 정상 세포주에는 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 특히, 발효 및 비발효 차가버섯 추출물에서 본 실험에 사용한 세포주 중에서 대장암 세포주 HCT-15에 대해 가장 세포 증식 억제효과가 뛰어났으며, 이러한 효과는 첨가 농도 의존적 이였다. 발효 및 비발효 차가버섯 추출물에 의한 암세포 증식억제가 기전 연구로 apoptosis가 일어날 때 나타나는 DNA fragmentation을 세포로부터 genomic DNA를 분리하여 agarose gel electrophoresis 방법으로 조사한 결과, 정상세포인 NIH3T3 세포는 DNA fragmentation이 거의 일어나지 않아 세포 생존율 결과와 유사한 경향을 보였으나, 특히 대장암 세포주인 HCT-15에서는 발효 차가버섯뿐만 아니라 비발효 차가버섯 추출물에서도 DNA fragmentation이 많이 일어나는 것이 관찰되어 암세포 증식억제 효과가 높다는 결과를 뒷받침 해주고 있다. This study was performed to investigate the effect of the water-extract from non-fermented or fermented Chaga mushrooms (Inonotus obliquus) on the proliferation and apoptosis of the NIH3T3 mouse normal fibroblast cells and various human cancer cell lines including HCT-15 human colon carcinoma, AGS human gastric carcinoma, MCF-7 human breast adenocarcinoma, Hep3B human hepatocellular carcinoma and HeLa human cervical carcinoma using MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay and DNA fragmentation. In an anti-cancer test using various human cancer cells, fermented Chaga mushroom extract showed higher antiproliferating effect than that of non-fermented Chaga mushroom extract. Mouse normal NIH3T3 cells were exhibited 80% above survival under fermented or non-fermented Chngn mushroom extract of various concentrations(0, 0.5 and 1 mg/ml). Fermented Chaga mushroom extract significantly inhibited cell growth on HCT-15 cells in a dose-dependent manner. HCT-15 cells treated with non-fermented or fermented Chaga mushrooms extract produced a distinct oligonucleosomal ladder with different sizes of DNA fragments, a typical characteristic of cells undergoing apoptosis. These results suggest that fermented Chaga mushroom extract suppresses growth of HCT-15 human colon carcinoma cells through apoptosis.