Abstract
The opportunity of Ca2+-sensitive fluorescent dye Fluo-4 AM and spectrofluorimetry method application for the study of energy-dependent Ca2+ accumulation in mitochondria from uterus smooth muscle is proved. It has been found that the presence of mitochondrial preparation increases time-dependent fluorescent response considerably and this effect depends on Ca2+ concentration in the medium. Thus, in these conditions, deesterification active probe is formed which is sensitive to Ca2+. It is shown that the accumulation of calcium ions in mitochondria in the presence of Mg-ATP and succinate depends on exogenous Ca2+ concentration and is characterized by substrate saturating. The apparent activation constant of Ca2+ accumulation is 53.9 +/- 6.9 mM, which corresponds to the physiological concentration of the cation in the cell next to mitochondria. Transit addition of Ca2+-ionophore A23187 to the incubation me- dium caused a rapid release of ionized cation from mitochondria. When proton gradient on the inner mitochondrial membrane is dissipated by protonophore CCCP, in the case of suppressing the generation of the gradient by oligomycin and in the presence of ruthenium red that inhibits Ca2+ mitochondrial accumulation systems, Ca2+ entry is significantly reduced. The results indicate the prospects of using Fluo-4 AM to study the properties of the Ca2+ accumulation system in isolated mitochondria of the myometrium.
Highlights
Н а сьогодні сформовано надійне уявлення про можливе значення мітохондрій (МХ) як Са2+-депо в електрозбудливих клітинах
При цьому максимум емісії характеризується лише невеликим зсувом у короткохвильову область із зростанням концентрації Са2+, що підтверджує інформацію щодо відсутності або слабкої залежності положення піка флуоресценції від наявності катіона, яка є характерною рисою подібних Fluo-4 АМ зондів [14]
It has been found that the presen ce of mitochondrial preparation increases time-dependent fluorescent response considerably and this effect depends on Ca2+ concentration in the medium
Summary
Характеристика фракції ізольованих МХ із використанням фотонної кореляційної спектроскопії. Функцію розподілу гідро динамічного діаметра (характеристичного розміру) МХ визначали методом фотонної кореляційної спектроскопії [24,25,26] в середо вищі такого складу (в мМ): 20 HEPES (рН 7,4), 250 сахароза, 2 Рі (у вигляді К+-фосфатного буфера, рН 7,4), 3 MgCl2, 3 АТР, 5 сукцинат натрію. Навантаження МХ зондом Fluo-4 AM (Invitrogen, США) в концентрації 2 мкМ проводили в середовищі, яке містило 10 мМ HEPES (рН 7,4; 37 °С), 250 мМ сахарози, 0,1%-й бичачий сироватковий альбумін протягом 30 хв при температурі 37 °С. Вивчення змін іонізованого Са в матриксі МХ проводили також із використанням методу протокової цитофлуориметрії на протоковому цитометрі COULTER EPICS XLTM (Beckman Coulter, США) із програмним забезпеченням SYSTEM IITM Software (Beckman Coulter, США). Використовували робочий протокол аналізу зразків, який був створений нами для характеристики фракції ізольованих МХ міометрія. Статистичний аналіз одержаних даних проводили із використанням пакета стандартних програм ІВМ РС, застосовуючи загальновідомі методи [27] і t-критерій Стьюдента
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
