Abstract
In a previous study we cloned GSH2 gene, encoding gamma-glutamylcysteine synthetase (gammaGCS) in the yeast Hansenula polymorpha. In this study an analysis of molecular organisation of the H. polymorpha GSH2 gene promoter was conducted and the potential binding sites of Yap1, Skn7, Creb/Atf1, and Cbfl transcription factors were detected. It was established that full regulation of GSH2 gene expression in the response to cadmium and oxidative stress requires the length of GSH2 promoter to be longer than 450 bp from the start of translation initiation. To study the transcriptional regulation of H. polymorpha GSH2 gene recombinant strain, harbouring a reporter system, in which 1.832 kb regulatory region of GSH2 gene was fused to structural and terminatory regions of alcohol oxidase gene, was constructed. It was shown that maximum increase in H. polymorpha GSH2 gene transcription by 33% occurs in the rich medium under four-hour incubation with 1 microM concentration of cadmium ions. In the minimal medium the GSH2 gene expression does not correlate with the increased total cellular glutathione levels under cadmium ion treatment. We assume that the increased content of total cellular glutathione under cadmium stress in the yeast H. polymorpha probably is not controlled on the level of GSH2 gene transcription.
Highlights
Кадмій є сильним мутагеном та канцерогеном із періодом півжиття 10–30 років, що робить його кумулюючим токсином і створює серйозну проблему забруднення навколишнього середовища та загрозу здоров’ю людини [1]
У дріжджів детоксикація кадмію включає синтез хелатуючих молекул, які зв’язують іони кадмію та опосередковують їх транспортування із клітини або секвестрування комплексів із металом у вакуолю [3, 4]
Для виміру активності АОХ клітини дріжджів H. polymorpha попередньо вирощували в 5 мл середовища YNB (1% глюкози) протягом ночі
Summary
Конструювання репортерної касети prGSH2-AOX та одержання рекомбінантного штаму, що містить цю касету. З метою конструювання репортерної касети prGSH2-AOX промотор гену GSH2 довжиною 1,832 т.п.н. 1) та геномної ДНК штаму CBS4732 leu H. polymorpha. Фрагменти ДНК, що відповідають промотору гену GSH2 та ВРТ-Т ділянці AOX, послідовно було розщеплено ендонуклеазами рестрикції HindIII і NotI та одночасно клоновано у вектор pGLG61, попередньо лінеаризований за унікальним сайтом рестрикції NotI Сконструйовану плазміду було використано для трансформації клітин H. polymorpha штамів NCYC495 leu та CBS4732 leu. Для виміру активності АОХ клітини дріжджів H. polymorpha попередньо вирощували в 5 мл середовища YNB (1% глюкози) протягом ночі. Фрагмент ДНК H. polymorpha, що містить ген LEU2 (HpLEU2) позначено товстою сірою смугою; послідовність промотору гену GSH2 H. polymorpha – товстим чорним відрізком; ВРТ гену АОХ – незабарвленою смугою; термінатор АОХ – товстим посмугованим відрізком; послідовність pUC19 – тонкою чорною лінією. У промоторній ділянці гену GSH2 H. polymorpha позначено ймовірні сайти зв’язування транскрипційних факторів
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
