Abstract
A problem of "prozone" formation in agglutination of corpuscular antibodies by bivalent antibodies was considered. Using a new coordinate system, which was proposed by us earlier, we analyzed theoretical and experimental curves that describe relations between bivalent antibody concentration and some blocking factors. It was shown that occupation of antibody paratopes by a blocking factor or by antiidiotypic antibodies can induce "prozone" formation. It was also demonstrated that experimental titration curves for a mixture of antibodies and corresponding antigens coincide with theoretical curves that were calculated according to our theory. Our data also demonstrate that major part of serum antibodies are blocked by antiidiotypic antibodies when maximum of antibody formation is over and antibody titers come down.
Highlights
Материалы и методыВ работе использовали такие реагенты: овальбумин (ОВА), моноклональные антитела к ОВА, козьи антитела к IgG мышей, конъюгированные с пероксидазой хрена (все реактивы Sigma, США).
Овальбумин сорбировали на плашках (Dynatech, США), инкубируя раствор ОВА (10 мкг/мл в фосфатном буфере, рН 7,4, по 0,1 мл на лунку) при 4 °С в течение суток, после чего плашки непосредственно перед опытом тщательно отмывали в проточной воде и затем использовали для исследований методом ИЭА.
Образцы антисывороток или моноклональных антител, разведенные в определённое количество раз, помещали в лунки плат с сорбированным ОВА, платы инкубировали в течение часа при постоянном перемешивании на шейкере (Dynatech, США), а затем тщательно отмывали проточной водой от несвязавшихся антител и добавляли козьи анти-IgG антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Summary
В работе использовали такие реагенты: овальбумин (ОВА), моноклональные антитела к ОВА, козьи антитела к IgG мышей, конъюгированные с пероксидазой хрена (все реактивы Sigma, США). Овальбумин сорбировали на плашках (Dynatech, США), инкубируя раствор ОВА (10 мкг/мл в фосфатном буфере, рН 7,4, по 0,1 мл на лунку) при 4 °С в течение суток, после чего плашки непосредственно перед опытом тщательно отмывали в проточной воде и затем использовали для исследований методом ИЭА. Образцы антисывороток или моноклональных антител, разведенные в определённое количество раз, помещали в лунки плат с сорбированным ОВА, платы инкубировали в течение часа при постоянном перемешивании на шейкере (Dynatech, США), а затем тщательно отмывали проточной водой от несвязавшихся антител и добавляли козьи анти-IgG антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена. Плашки инкубировали с указанным конъюгатом в течение 1 ч при 4 °С, после чего тщательно промывали и добавляли субстрат пероксидазы, а именно смесь ортофенилендиамина (1 мг/мл) и 0,003%-го Н2О2. После развития окраски субстрата реакцию останавливали добавлением к каждой лунке 0,06 мл 2 М серной кислоты и измеряли абсорбцию содержимого лунок плашек на микрофотоколориметре (ELx800, BIO-TEK) при длине волны 490 нм
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
