귤피 유래 면역활성 람노갈락투로난류의 신속 분리방법

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다당의 생물활성은 다당의 구조적인 특징과 분자량 분포에 의해 중요한 영향을 미치기 때문에, 특정 다당의 정제는 다당 연구를 위해 필수적이다. 따라서 본 연구에서는 서로 다른 특성을 소유한 다당의 분획을 위한 신속 분리 방법을 개발하고 대표 화합물로 한국산 귤피로부터 조제한 다당 혼합물을 이용, 본 분리법을 최적화 하였다. 귤피는 펙티나아제 처리 후 에탄올 침전법을 통해 조다당 획분인 CPE로 조제되었으며, CPE는 재차 농도별로 연속 희석된 에탄올 용액(EtOH:DIW=8:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1.5:1, 1:1, 및 0.5:1)을 이용하여 7가지 획분(CPE8-CPE0.5)으로 분획되었다. CPE8-CPE1획분은 구성당 분석 결과 람노갈락투로난-I과 람노갈락투로난-II 다당의 지표 구성당인 총 11종의 서로 다른 당으로 구성되어 있었으며, arabino-<TEX>${\beta}$</TEX>-3,6-galactan 잔기를 함유하고 있는 것으로 확인되었다. 그러나 CPE0.5 획분에서는 람노갈락투로난-II 및 arabino-<TEX>${\beta}$</TEX>-3,6-galactan 잔기를 함유하고 있지 않았다. 한편, CPE8-CPE1 획분을 처리한 mouse 복강 대식세포에서는 농도의존적으로 IL-6의 생산 증가가 관찰된 반면, CPE1 및 CPE0.5 획분에서는 활성이 급격히 감소됨을 확인 할 수 있었다. 따라서 이상의 결과로부터 분리방법이 다양한 특성을 갖는 다당의 혼합물로부터 생물활성을 갖는 람노갈락투로난류를 신속히 분리하는데 매우 유용한 것으로 판단되었다. We developed a rapid isolation method for fractionation of polysaccharides with different characteristics, and optimized it for the polysaccharide mixture from Korean citrus peels. A crude polysaccharide mixture, citrus-peel-enzyme (CPE) fraction was isolated from the citrus peels digested with pectinase and ethanol precipitation. CPE was further fractionated with serially diluted ethanol solution (ethanol:deionized water=8:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1.5:1, 1:1, and 0.5:1) to produce seven fractions labeled from CPE8 to CPE0.5. Fraction from CPE8 to CPE1 were mostly composed of 11 different sugars, including rhamnogalacturonan (RG) I and II, and the sugars contained arabino-<TEX>${\beta}$</TEX>-3,6-galactan moiety. However, CPE0.5 did not contain RG-II and arabino-<TEX>${\beta}$</TEX>-3,6-galactans. Treatment of macrophages with fractions CPE8-CPE1 led to a dose-dependent increase in interleukin-6 production (IL-6), while treatment with CPE1 and CPE0.5 fractions resulted in decreased levels of IL-6. These results indicate that this isolation method may be useful for the rapid fractionation of bioactive RGs from polysaccharide mixtures.