Активность фагоцитоза у больных атопическим дерматитом c подтвержденной контаминацией кожи дрожжами рода Candida spp

Abstract

Фагоцитоз является неотъемлемой частью защиты организма от патогенов: его нарушения обусловливают развитие сопутствующих заболеваний и осложнений у больных атопическим дерматитом (АтД). Цель работы - оценка активности фагоцитоза у больных АтД c подтвержденной контаминацией кожи грибками рода Candida и определение экспрессии рецепторов нейтрофилов, необходимых для осуществления завершенного фагоцитоза. Методика. В исследовании приняли участие 70 больных АтД и 22 донора, все подписывали форму информированного согласия. Работа с кровью людей проводилась по международным правилам. Наличие контаминации микроскопическими грибками верифицировали методом полимеразо-цепной реакции в реальном времени (ПЦР). Нейтрофилы периферической крови выделяли на градиенте Перколла в интерфазе между 81% и 70%, отмывали, переводили в полную среду и анализировали ex vivo на активность фагоцитоза с дрожжами Candida tropicalis. Клетки обрабатывали антителами к рецепторам, а также пропидиумом иодидом, и анализировали на проточном цитометре FACSCalibur. Статистическую обработку результатов проводили по программе ANOVA. Результаты. Было установлено нарушение фагоцитарной активности нейтрофилов у больных АтД с сопутствующим поражением кожи грибками, что коррелировало с тяжестью течения АтД и статистически значимо отличалось от показателей больных АтД, не контаминированных возбудителями микозов. Экспрессия рецепторов, ассоциированных с фагоцитозом, различалась у больных АтД в зависимости от наличия или отсутствия Candida spp. Заключение. Установлены нарушения фагоцитарной активности нейтрофилов у больных АтД с верифицированной контаминацией кожи Candida spp., а также различия в экспрессии рецепторов фагоцитоза по сравнению с больными АтД без контаминации кожи дрожжами рода Candida.Phagocytosis is an integral part of the body defense against pathogens. Disturbance of phagocytosis results in development of concomitant diseases and complications in patients with atopic dermatitis (AD). The aim of this study was to measure the activity of phagocytosis in AD patients with fungal contamination of skin and to determine the expression of neutrophil receptors required for completing phagocytosis. Methods. 70 patients with AD and 22 donors participated in this study and signed an informed consent form. All experiments were performed in compliance with international rules for work with human biological materials. The presence of fungi on the skin was verified using the polymerase chain reaction in real time (PCR). Peripheral blood neutrophils were isolated on the Percoll gradient in the interphase between 81% and 70%, washed, transferred to the complete medium, and analyzed ex vivo for phagocytosis activity using yeast Candida tropicalis as a model system. Neutrophils were stained with monoclonal antibodies to the phagocytosis receptor and propidium iodide for DNA visualization and analyzed on a FACSCalibur flow cytometer. Statistical analysis was performed using ANOVA. Results. Impaired neutrophil phagocytic activity was found in AD patients with concomitant fungal contamination of the skin, which correlated with severity of AD and statistically significantly differed from that in AD patients without contamination with Candida spp. pathogens. The expression of phagocytosis-associated receptors varied in AD patients depending on the presence or absence of Candida spp. contaminants. Conclusion. Disordered neutrophil phagocytic activity was found in AD patients with verified Candida spp. contamination; the expression of phagocytosis receptors was different from that in AD patients without Candida contamination of the skin.