Abstract
Objective of the study was to develop monoclonal immunoassay for the detection of the pseudotuberculosis agent, serogroup I. Materials and methods. Specific components, that were used for immune-chromatographic test-system development were mouse monoclonal antibodies of hybrid cell lines, obtained to lipopolysaccharide antigen of the outer membrane of the pathogen’s «cold» variant (YP-101N2V4, YP-105S5A10); and rabbit anti-species antibodies against murine immunoglobulins. Particles, (30±2) nm in the diameter, were used to prepare colloidal gold-antibody conjugate. Antibody concentration for conjugation was 10-15 % greater than the D580 exit point on the plateau. For the production of immune-chromatographic test-system a set of membranes - MDI Easypack - manufactured by «Advanced Microdevice», India was deployed. Finished conjugate was applied onto the membrane by means of impregnation. Antibodies in the selected quantities were applied onto the analytical and control membranes via Dispensers. Substrates coated with the conjugate and ready-made working membranes were vacuum dried in a heat cabinet. Assembled immune-chromatographic test-systems were cut off 4.5 mm each and tested for specificity and sensitivity. Results and conclusions. Developed has been immune-chromatographic test-system for the detection of pseudotuberculosis pathogen, serogroup I. Utilized have been monoclonal antibodies of the hybrid cell line YP-105C5A10 in colloidal gold conjugate and monoclonal antibodies of the hybrid cell line YP-101H2B4 in the test line. The test-system allows for the detection of Y. pseudotuberculosis strains, serogroup I, at concentrations varying from 500 ths. m.c.·cm -3 (8 of the 11 strains under study) up to 4 million m.c.·cm -3 and does not identify closely related yersinia and heterologous microorganisms in quantities of 100 million m.c.·cm -3 .
Highlights
That were used for immune-chromatographic test-system development were mouse monoclonal antibodies of hybrid cell lines, obtained to lipopolysaccharide antigen of the outer membrane of the pathogen’s «cold» variant (YP-101N2V4, YP-105S5A10); and rabbit anti-species antibodies against murine immunoglobulins
The test-system allows for the detection of Y. pseudotuberculosis strains, serogroup I, at concentrations varying from 500 ths. m.c.·cm–3 (8 of the 11 strains under study) up to 4 million m.c.·cm–3 and does not identify closely related yersinia and heterologous microorganisms in quantities of 100 million m.c.·cm–3
В результате проведенных исследований разработана высокочувствительная и специфичная иммунохроматографическая моноклональная тестсистема, перспективная для выявления возбудителя псевдотуберкулеза серогруппы I
Summary
В работе использованы: золотохлористоводородная кислота («Sigma», США), цитрат натрия, Твин-20, бычий сывороточный альбумин (БСА) («MP Biomedicals», Великобритания), NaCl, K2CO3, KH2PO4, Na2HPO4, Na2B4O7 («Химмед», Россия), полиэтиленгликоль-40000 («Sigma», США). В качестве специфических компонентов иммунохроматографической тест-системы были использованы: мышиные моноклональные антитела (МкАт) гибридных клеточных линий, полученные на липолисахаридный (ЛПС) антиген наружной мембраны «холодового» варианта псевдотуберкулезного микроба I серотипа (YP-101Н2В4, YP-105С5А10); кроличьи антивидовые антитела против иммуноглобулинов мыши. Для получения конъюгата коллоидного золота с антителами (КЗ-АТ) были использованы частицы диаметром (30±2) нм. Оптимальную концентрацию МкАт для получения конъюгата КЗ-АТ определяли на основании полученных фотометрических данных, используя длину волны 580 нм (D580). При приготовлении конъюгата КЗ-АТ в коллоидное золото с pH 9,0 вносили раствор иммуноглобулинов с выбранной концентрацией. Смесь КЗ-АТ перемешивали на вортексе и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. По окончании времени инкубации в смесь добавляли 4 % ПЭГ-40000 в объеме, необходимом для получения конечной концентрации 0,25 %, и вновь перемешивали содержимое на вортексе.
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call
