Abstract
Tumor progression is accompanied by dysregulation of cell proliferation and apoptosis, which plays an essential role in breast cancer pathogenesis and cell resistance to chemotherapy. The role of protein carbonylation in molecular mechanisms of regulating MCF-7 breast cancer cell proliferation under the effect of roscovitine, a selective inhibitor of cyclin-dependent kinases, was evaluated. The cells were grown in adherent cell culture with or without roscovitine. The levels of reduced/oxidized glutathione and the concentration of protein carbonyl derivatives were determined by spectrophotometry. The cell cycle was evaluated by the flow cytometry; the same technique was used to measure the reactive oxygen species (ROS) concentration. Cell culture with roscovitine resulted in a decrease in the redox potential of the glutathione system and a rise in the ROS and protein carbonyl derivative concentrations. Roscovitine contributed to the G 0 /G 1 and G 2 /М phase arrest due to its interaction with ATP-binding sites of cyclin-dependent kinases. Roscovitine could also promote enzyme carbonylation. The obtained results can be further used for development of personalized approaches to breast cancer therapy.
Highlights
Tumor progression is accompanied by dysregulation of cell proliferation and apoptosis, which plays an essential role in breast cancer pathogenesis and cell resistance to chemotherapy
The cells were grown in adherent cell culture with or without roscovitine
The levels of reduced/oxidized glutathione and the concentration of protein carbonyl derivatives were determined by spectrophotometry
Summary
Исследования были выполнены с использованием опухолевой клеточной линии МСF-7 (аденокарцинома молочной железы человека), полученной из Российской коллекции клеточных культур Института цитологии РАН Опухолевые клетки линии МСF-7 культивировали адгезионным методом в полной питательной среде. Жизнеспособность клеток оценивали микроскопическим методом с трипановым синим (Serva, США). Клетки линии МСF-7 инкубировали в отсутствии или присутствии селективного ингибитора циклин-зависимых киназ – росковитина (ROSC, «Sigma Aldrich», США) – в конечной концентрации 20 мкМ [7] в течение 18 ч при 37 °C и 5%-м CO2. Интенсивность необратимой окислительной модификации протеинов в клетках линии МСF-7 определяли по содержанию карбонильных производных белков методом, основанным на реакции. Содержание восстановленного (GSH) и окисленного (GSSG) глутатиона в клетках линии МСF-7 оценивали методом, предложенным М. Содержание активных форм кислорода (АФК) определяли методом проточной цитофлуориметрии на проточном лазерном цитометре «FaCSCanto II» (Becton Dickinson, США). Оценку распределения клеток линии МСF-7 по фазам клеточного цикла проводили методом проточной цитофлуориметрии по протоколу Cycle Test Plus (Becton Dickinson, США). Статистическую значимость различий независимых выборок оценивали с помощью непараметрического критерия Манна – Уитни для малых групп
Sign-in/Register to view highlights & summary Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callMore From: Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук
Disclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
