Abstract
Anti-histone autoantibodies belong to main marker antibodies used in the diagnostics of systemic lupus erythematosus (SLE) patients. During autoimmune diseases, especially in SLE, prevalent process of inflammation is caused by high titers of auto-antibodies. It is known that the level of IgG sialylation affect their anti-inflammatory properties. The aim of the experiments was to investigate the level of sialylation of anti-histone IgG-antibodies from blood serum of patients with SLE. Investigation was carried out by two methodological approaches. In the first case, the antibodies were purified from blood serum by affine chromatography on histone-Sepharose and protein G-Sepharose followed by Western blot detection of sialic acid residues in the carbohydrate chaines of IgG molecules using sialospecific previously biotinylated Sambucus nigra lectin (SNA). In the second case, IgG-antibodies were isolated from blood serum by affine chromatography on protein G-Sepharose, this fraction was separated on sialylated and not sialylated IgG by SNA-Sepharose chromatography followed by checking their affinity to histones by ELISA. In this manuscript, it is shown that the level of sialylation of anti-histone IgG is lower than in control preparation of antibodies. Our data showed that anti-histone autoantibodies are devoid of sialic acid residues at the ends of the carbohydrate chains of Fc-fragments promote their inflammatory properties in patients with SLE. Keywords: blood serum, anti-histone auto-antibodies, systemic lupus erythematosus, carbohydrate chains, sialic acid residues. Note: ELISA – enzyme linked immunosorbent assay, Ab – antibodies, auto-Ab – auto-antibodies.
Highlights
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬСироватку крові хворих на системний червоний вовчак (СЧВ) одержували згідно з умовами спільного Німецько-Українського проекту ІБК НАН України з Інститутом клінічної імунології
Імуноглобуліни класу G (IgG) сироватки крові людини – це гетеротетрамерні глікопротеїни, які складаються з двох важких (γ) і двох легких (λ або κ) ланцюгів, з’єднаних між собою дисульфідними зв’язками [1, 2]
Havrylyuk A.M. et al Anti-histone H1 IgGs from blood serum of systemic lupus erythematosus patients are capable of hydrolyzing histone H1 and myelin basic protein
Summary
Сироватку крові хворих на системний червоний вовчак (СЧВ) одержували згідно з умовами спільного Німецько-Українського проекту ІБК НАН України з Інститутом клінічної імунології Препарати сіалованих і несіалованих IgG-антитіл, попередньо отримані зі сироватки крові хворих на СЧВ хроматографією на SNA-се фарозі, тестували на імунореактивність щодо тотальних гістонів тимусу теляти. Планшети тричі промивали ТБС, що містив 0,05% твін-20, і блокували 5% БСА (–Sigma”, США) у цьому ж буфері впродовж 2 год при 37°C. У лунки вносили препарати АТ (5 мкг/мл) та інкубували 2 год при 37°C у ТБС-буфері, що містив 2% БСА та 0,05% твін-20. Електрофорез білків проводили у 12% поліакриламідному гелі (ПААГ) за присутності 0,1% ДСН у трис-глі цин овому буфері рН 8,3 при 100 B протягом 3 год, використовуючи камеру для електрофорезу Mini-PROTEAN Tetra Cell („Bio-Rad”, США). Після перенесення білків мембрану промивали ТБС із 0,05% твін-20 і 0,1 М CaCl2, та блокували 5% БСА, розчиненою у тому ж буфері протягом 18 год при 4°C.
Sign-in/Register to view highlights & summary Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
