Влияние трансдермальной пленки с эритропоэтином на гибель лимфоцитов и процессы свободнорадикального окисления в крови при экспериментальной термической травме у крыс

Abstract

Цель - изучение влияния эритропоэтина в составе трансдермальной пленки на характер гибели лимфоцитов и процессы свободнорадикального окисления в крови при экспериментальной термической травме у крыс. Методика. Эксперименты выполнены на 90 белых нелинейных крысах-самцах массой 220±20 г. Животные были случайным образом разделены на 3 группы: группа 1 (n=10) - интактный контроль, группа 2 (n=40) - термическая травма с наложением на область ожога асептической повязки, группа 3 (n=40) - термическая травма с наложением на область ожога трансдермальной пленки с эритропоэтином. Термическую травму ІІІА степени (площадь 3,5% поверхности) воспроизводили под общим наркозом погружением межлопаточной области кожи в очищенную воду (t= 98-99 ºС). Эритропоэтин (42 МЕ/см2) в составе трансдермальной пленки (площадь 12 см2) наносили ежедневно сразу после травмы. Исследование крови проводили на 3-и, 5-е, 8-е и 14-е сут. Гибель лимфоцитов, выделенных из крови на градиенте плотности фиколл-верографин (1,077), оценивали при окрашивании клеток конъюгированным с флюорохромом аннексином V и 7-аминоактиномицином D. Дифференцировали интактные клетки, клетки с ранними признаками апоптоза, клетки с поздними признаками апоптоза и частично некротизированные клетки. Содержание продуктов ПОЛ оценивали спектрофотометрически, определяли активность супероксиддисмутазы в плазме, каталазы в плазме крови и эритроцитах. Результаты. Показано, что при термической травме увеличивается количество лимфоцитов в крови с ранними и поздними признаками апоптоза и некроза, содержание диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов, оснований Шиффа в липидных экстрактах плазмы и лимфоцитов, возрастает также активность каталазы в плазме и эритроцитах, активность супероксиддисмутазы в плазме крови снижается. В условиях применения эритропоэтина в составе трансдермальной пленки наблюдается уменьшение количества лимфоцитов с ранними и поздними признаками гибели, снижается активность процессов ПОЛ в плазме и лимфоцитах, а также активность каталазы в плазме и эритроцитах и возрастает активность супероксиддисмутазы в плазме крови. Заключение. Использование эритропоэтина в составе трансдермальной пленки при термической травме снижает выраженность гибели лимфоцитов, активность процессов ПОЛ, повышает активность супероксиддисмутазы в плазме крови по сравнению с группой животных с термической травмой без применения эритропоэтина. Aim. Studying the effect of erythropoietin (EPO) as a component of the transdermal film (TDF) on lymphocyte apoptotic death and free radical oxidation in blood of rats with experimental thermal injury (TI) (trauma). Methods. Experiments were performed on 90 white mongrel male rats weighing 220±20 g. The IIIA grade TI with a burn area of 3.5% body surface was induced under general anesthesia by immersing the interscapular region of the skin in purified water at 98-99ºС. EPO (42 IU/cm2) as a component of the 12 cm2 TDF was applied daily, immediately after the TI. The animals were randomized to three groups: group 1 (n=10), intact control; group 2 (n=40), TI with application of an aseptic dressing to the burn area; group 3 (n=40), TI with application of the EPO-containing TDF to the burn area. The study was conducted at days 3, 5, 8, and 14 after TI. Lymphocytes were isolated from blood using the ficoll-verographin density gradient (1.077) and their apoptosis was evaluated by staining the cells with fluorochrome-conjugated Annexin V (Annexin-5-FITC) and 7-aminoactinomycin D (7-AAD). The cells were differentiated into intact cells, cells with early apoptosis signs, cells with late apoptosis signs, and partially necrotized cells. Concentration of lipid peroxidation (LP) products was measured spectrophotometrically; superoxide dismutase (SOD) activity was measured in plasma and catalase activity was measured in plasma and red blood cells. Results. TI increased the count of lymphocytes of the Annexin-5-FITC+/7-AAD (early apoptosis signs) and Annexin-5-FITC+/7-AAD+ (late apoptosis or necrosis signs) phenotypes, and concentrations of dienic conjugates, ketodienes, conjugated trienes, and Schiff bases in heptanol and isopropanol phases of plasma and lymphocyte lipid extracts. Plasma and red cell catalase activities were increased whereas plasma SOD activity was decreased. Application of EPO as a component of the TDF decreased the amount of lymphocytes with early and late apoptosis signs and the contents of dienic conjugates, conjugated ketodienes and trienes, Schiff bases in plasma and lymphocytes, and catalase activity in plasma and erythrocytes, and increased the plasma activity of SOD. Conclusion. The use of EPO as a component of TDF in TI reduced lymphocyte apoptosis, activity of LP processes, and increased the plasma activity of SOD compared to the group of animals with TI without the EPO treatment.