Oral Fat Tolerance Test in Male and Female C57Bl/6 Mice

Abstract

Postprandial hyperlipidemia is an important risk factor for cardiovascular diseases, and it can be evaluated by an oral fat tolerance test (OFTT). There is no consensus on how to perform the OFTT in rodents, especially in the C57BL/6 mice strain. Furthermore, there is no consensus in the literature regarding several variables involved in the test (e.g., dietary lipid source and fasting duration), and consequently, there is no standardization for the OFTT protocol. Therefore, we aimed to demonstrate a protocol for OFTT in male and female C57BL/6 mice. Briefly, mice underwent a 2 h-fasting period followed by blood collection from the tail and orogastric gavage of 200 μl soybean oil. Blood was collected again at 1, 2, and 3 h after gavage, and centrifuged for triglyceride quantitation through a colorimetric enzymatic assay. Triglyceridemia was evaluated throughout the test, and the area under the curve was calculated. The present protocol contributes to standardizing the OFTT protocol in C57BL/6 mice and enables future research regarding the influence of sex and cardiometabolic diseases on postprandial lipemia., [摘要]餐后高脂血症是心血管疾病的重要危险因素，可通过口服脂肪耐量试验（OFTT）进行评估。关于如何在啮齿动物中执行 OFTT 没有达成共识，尤其是在 C57Bl/6 小鼠品系中。此外，关于测试中涉及的几个变量（例如，膳食脂质来源和禁食持续时间）在文献中没有达成共识，因此，对于 OFTT 协议没有标准化。因此，我们旨在展示雄性和雌性 C57Bl/6 小鼠的 OFTT 协议。简而言之，小鼠经历了 2 小时的禁食期，然后从尾巴和口胃管中采集了 200 μl 的血液。豆油。血液在1，2再次收集，和管饲后3小时，并离心甘油三酯孔定量吨通过比色酶分析通货膨胀。在整个测试过程中评估甘油三酯血症，并计算曲线下面积。本协议有助于规范 C57Bl/6 小鼠的 OFTT 协议，并使未来研究性和心脏代谢疾病对餐后脂血症的影响成为可能。[背景]脂质代谢中产生的甘油三酯（TG）的量与心脏代谢疾病的发生和发展具有重要的相关性。餐后高脂血症是一个重要的心血管风险标志物，因为其中通常血脂分数分析，TG是第一食品摄入量（后更改Nordestgaard ，2016）。最近，国际协会建议血脂分析不再需要禁食。首先是因为个体大部分时间都处于餐后状态，其次是因为进食或禁食个体之间的 TG 没有显着差异（Nordestgaard等，2016）。口服脂肪糖耐量试验（OFTT）是评估餐后一种可靠的方法高脂血症，因为它代表了身体的能力，以normaliz è脂质摄入高脂血症，使脂质代谢更深刻的分析。OFTT 包括给予特定食物并监测其在体内的代谢反应（Langsted和Nordestgaard ，2011 年）。 动物模型对于研究代谢和心脏代谢疾病至关重要；然而，有目前没有关于如何在啮齿类动物进行OFTT共识，因此，有间出版OFTT协议广泛的变化。最近的一项研究表明，OFTT结果由米影响的OU ë应变，膳食脂质源，空腹持续时间，和性别（落合，2020）。虽然落合等人。表明，其它菌株中号AY在OFTT（更好的响应落合，2020年），C57BL / 6小鼠CONTIN UE是用于研究最多的应变心脏代谢疾病（姆法齐奥和林顿，2001）; 因此，它已经变得至关重要，建立一个协议，以评估餐后血脂这些动物。 在 C57Bl/6 小鼠中进行的绝大多数 OFTT 研究使用橄榄油（Kimura等人，2011 年和 2013 年；Toyoda-Ono等人，2007 年；Hiel等人，2018 年；Sairyo等人，2018 年）；人虽然，有椰子（含油酸富含）的一些报道（埃尔南德斯瓦列霍等，2009），红花（山崎等人。，2012）和玉米（王等人。，2010）油。落合等人。证明橄榄油和大豆油在ddY小鼠中表现出类似的 OFTT 结果( Ochiai , 2020)。同样重要的是要考虑的脂肪给药量，因为剂量报道中所述文献的范围为5毫升/公斤〜17毫升/千克（丰田大野等人，2007;王等人，2010; Sairyo等人。，2018）和所述体积的范围从150微升至400微升（Hernandez的瓦列霍等人，2009;木村等人，2011和2013;山崎等人。，2012）。在第的面对是证据，我们建议200的OFTT餐协议微升豆油，其对应于大约7毫升/公斤。我们没有正确的按体重油量，因为我们注意到预计该米范围内的体重波动的OU Ë菌株不显著改变的油管理的容积，而且也难以衡量注射器精确。 的空腹持续时间的范围可以从4小时至24小时（丰田大野等人，2007; Hernandez的瓦列霍等人。，2009;王等人，2010;木村等人，2011和2013;山崎等人。， 2012 年；Sairyo等人，2018 年）。考虑到空腹是啮齿动物应激事件（崔等人。，2005）和目前的指导方针^ h umans表明，空腹不再需要TG分析（Nordestgaard等人。，2016），我们提出的2短禁食协议H。最后，S当然也应该被考虑编，因为大多数研究都进行的雄性小鼠（丰田大野等，2007;埃尔南德斯瓦列霍等，2009;王等，2010;木村等人，2011年和2013；Yamazaki等人，2012 年；Hiel等人，2018 年；Sairyo等人，2018 年）。落合等人。表明女性不太容易发生脂质引起的高甘油三酯血症；然而，这些结果报告只ddY系小鼠（落合，2020年），牛逼HUS，我们选择提出了雄性和雌性小鼠的协议。 ANO考虑疗法两个重要的因素是频率和血液取样和米的定时乌斯代谢背景。关于前者，在TG峰将2之间出现小时，脂质给药后3小时（山崎等人。; 2012年Sairyo等人。，2018;落合，2020）。关于后者，一些研究在高脂肪喂养的小鼠中进行了 OFTT ，而其他研究则在健康小鼠中进行。根据落合等人的说法。，高脂肪和高蔗糖喂养一周足以促进 OFTT 期间脂质诱导的高甘油三酯血症（落合，2020）。 基于这些数据，我们的目的是证明使用200在雄性和雌性C57BL / 6小鼠为OFTT协议微升豆油2后- ħ禁食时期。