Abstract
Lentinula edodes es una seta comestible con potencial para el desarrollo de nutraceúticos. Sin embargo, son incipientes los trabajos enfocados en su producción biotecnológica y el desarrollo de herramientas analíticas que permitan profundizar en su composición. En esta investigación se estudió la producción de biomasa del hongo en el tiempo mediante fermentación en estado líquido y se seleccionaron las condiciones que permiten la obtención de extractos para la aplicación de herramientas para análisis proteómicos. Los métodos de extracción de proteínas, ácido tricloroacético (TCA)-Acetona y TCA-Acetona-Fenol, fueron comparados en términos del rendimiento de extracción y los perfiles de separación usando electroforesis en 1D (SDS-PAGE) y 2D (IEF-SDS PAGE). Se determinó que a los 10 días de crecimiento se obtiene la mayor producción de biomasa y proteína total. La extracción con TCA-Acetona-Fenol presentó un mayor rendimiento, mayor resolución y número de bandas en la electroforesis 1D. En 2DE los dos métodos permitieron la extracción de proteínas con puntos isoeléctricos en el rango de pH 3-10, pero el método TCA-Acetona-Fenol conllevó a una extracción diferencial, favoreciendo el rango de 33 a 113 kDa. Estos resultados se constituyen en una primera aplicación de técnicas de separación electroforética para futuros estudios proteómicos
Highlights
Pocos son los trabajos enfocados en la producción biotecnológica y el desarrollo de herramientas analíticas en torno a la Lentinula edodes, seta comestible con potencial para el desarrollo de nutracéuticos
Few are the investigations focused on the biotechnological production and the development of analytical tools about Lentinula edodes, an edible mushroom which has a potential for being used in the development of nutraceutical products
Trichloroacetic acid (TCA) - acetone and TCA - acetone - phenol were the two protein extraction methods which were compared in terms of extraction yield and separation profiles in 1D (SDSPAGE) and 2D (IEF-SDS PAGE) electrophoresis
Summary
Se trabajó con el micelio de una cepa de Lentinula edodes obtenida de la empresa Shroom supply, empresa localizada en Estados Unidos, la cual se encontraba en un medio mínimo líquido (formulación de la empresa no disponible). El micelio fue activado por fermentación sumergida en matraces marca Boeco de 100 mL con 50 mL de un medio líquido compuesto por papa (extracto de 250 g de papa sabanera en 1000 mL), glucosa marca Fisher Scientific 20 g/L y extracto de levadura DifcoTM 1,6 g/L. Se llevó a 150 rpm y 27 + 1 °C [29] en un shaker de agitación orbital marca Electrilab S.A.S. Al término de 15 días, el micelio obtenido se tomó como inóculo para estudiar la cinética de crecimiento para la producción de biomasa y proteína total
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